iPSCs干细胞的制备及细胞活力检测

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iPSCs干细胞的制备及细胞活力检测

引言

随着再生医学和干细胞研究的不断发展,诱导多能干细胞(iPSCs)因其具有无限增殖和分化成各种细胞类型的能力而备受瞩目。iPSCs的制备和细胞活力检测成为干细胞研究领域的关键技术。本文将介绍iPSCs的制备方法和常用的细胞活力检测试剂盒,为研究人员提供参考依据。

iPSCs的制备方法

iPSCs的制备通常采用重编程技术,将体细胞(如成纤维细胞或皮肤细胞)诱导为多能干细胞。常用的重编程方法包括:

逆转录病毒载体法:利用转染携带Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc等转录因子的逆转录病毒载体,将这些因子整合到体细胞基因组中,诱导其重编程为iPSCs。

腺病毒载体法:与逆转录病毒载体法类似,但使用腺病毒载体转染重编程因子。腺病毒载体可实现更高的转染效率,但存在免疫原性风险。

转座子系统法:利用转座子系统将重编程因子整合到体细胞基因组中,避免了病毒载体的使用,提高了iPSCs的安全性。

细胞活力检测试剂盒

细胞活力检测是评估细胞健康状况的重要指标,常用的细胞活力检测试剂盒包括:

MTT法:MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物)是一种黄色的四氮唑盐,被活细胞中的线粒体还原酶还原为蓝紫色甲臜,其吸光值与细胞活力成正比。

CCK-8法:CCK-8(2-(2-甲氧基-4-磺基苯基 azo)-5-[(3-甲基-2-噻唑基)苯]-3-甲酰胺)是一种水溶性四氮唑盐,也被活细胞中的线粒体还原酶还原为橙色甲臜,其吸光值与细胞活力成正比。

ATP检测法:ATP是细胞能量代谢的重要分子,其含量与细胞活力密切相关。ATP检测法利用荧光底物或发光底物检测细胞内ATP的含量,从而反映细胞活力。

结语

iPSCs的制备和细胞活力检测是干细胞研究领域的重要技术,为再生医学和疾病治疗提供了新的途径。随着技术的不断进步和优化,iPSCs的制备将更加安全和高效,细胞活力检测将更加灵敏和准确,从而为干细胞研究和临床应用奠定坚实的基础。

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